Multiplicação in vitro de Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen e Melissa Officinalis L.

Abstract

Este trabalho teve como objetivo estabelecer um protocolo eficiente de micropropagação e indução de brotos in vitro, para Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen e Melissa officinalis L., respectivamente, visando melhor eficiência para estudos farmacológicos, bem como o incentivo a preservação destas espécies de plantas medicinais, tão comumente utilizados no extrativismo humano. Para isto, dois capítulos foram desenvolvidos. No primeiro, utilizou-se segmentos nodais de plantas de P. glomerata cultivadas em campo que foram devidamente desinfestados e em seguida introduzidos em meio de cultura de estabelecimento (MS), suplementado com BAP (Benzilaminopurina-6) - 0,0 e 1,0 mg L-1, experimentos 1 e 2 respectivamente. Após os 60 dias as plantas obtidas foram seccionadas em 5 partes de 1,0 cm (explantes), contendo segmentos nodais, que foram introduzidas em meios de cultura de multiplicação in vitro, variando-se concentrações de BAP (0,0; 1,0; 2,0; 3,0 ou 4,0 mg L-1). Posteriormente, as brotações enraizadas (microplantas) foram transferidas para o processo de aclimatação, utilizando-se, como recipientes, garrafas de refrigerante do tipo PET. Avaliou-se o número médio de brotos por explante que revelou melhores resultados na combinação que utilizou 1,0 mg L-1 na fase do estabelecimento, com 3,0 mg L-1 na fase de multiplicação com uma média de 7,7 brotos/explantes. Com isso, foi possível estimar a obtenção de 57.000 plantas ao final de 6 meses com 3 subcultivos, demonstrando, assim, elevada produtividade. Além disso, constatou-se eficiência e viabilidade econômica quanto ao uso das garrafas PET para aclimatação. No segundo capítulo, estudou-se a indução de brotações a partir de segmentos nodais de plantas cultivadas in vitro de M. officinalis. Os segmentos nodais (explantes), na fase de estabelecimento, foram submetidos a desinfestação em solução de álcool etílico na concentração de 70%, durante 1 minuto, e em solução de hipoclorito de sódio (NaOH), nas proporções de 3 : 1 e 4 : 1, durante 15 minutos. Após isto, foram introduzidos em placas de Petri contendo meio de cultura MS adicionado com 1,0 e 2,0 mg L-1 de BAP, acrescido do fungicida (Carbomax®) na concentração de 1mg L-1, onde permaneceram em sala de crescimento, por 30 dias, sob fotoperíodo, temperatura e intensidade luminosa controladas. Após este período foram transferidos para frascos de 200 ml, contendo 20 mL do mesmo meio de cultura MS para assegurar o desenvolvimento das brotações, durante 30 dias. Em seguida as brotações foram transferidas para frascos de 200 ml, contendo 20 mL de meio MS com 1,0 mg L-1 de BAP e 1,0 mg L-1 de GA3, visando promover o alongamento das brotações, onde permaneceram por mais 30 dias. A concentração 1,0 mg L-1 de BAP apresentou maior número de brotos, com média de 4,0 brotos/explante e a utilização do regulador GA3 não induziu alongamento caulinar satisfatório.______________________________________________________________________________________ ABSTRACT:This study aimed to establish an efficient protocol for micropropagation and in vitro buds induction, to Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen and Melissa officinalis L., respectively, to better efficiency for pharmacological studies, and encouraging the preservation of these species of medicinal plants, as commonly used in human extraction. For this, two chapters have been developed. At first, we used nodal P. glomerata plants grown in the field which have been properly decontaminated and then introduced into a means of establishing (MS) culture medium supplemented with BAP (6-benzylaminopurine) - 0.0 to 1, 0 mg L-1, experiments 1 and 2 respectively. After 60 days the plants obtained were cut into 5 pieces 1.0 cm (explants) containing nodal segments, which were introduced in vitro proliferation culture media, varying concentrations of BAP (0.0, 1, 0, 2.0, 3.0 or 4.0 mg L-1). Subsequently, the rooted shoots (microplants) were transferred to the acclimatization process, using as containers, soda bottles PET type. We evaluated the average number of shoots per explant which showed better results in the combination that used 1.0 mg L-1 at the stage of establishment, with 3.0 mg L-1 in the multiplication phase with a 7.7 sprouts / explants. Thus, it was possible to estimate the achievement of 57,000 plants at the end of 6 months with three subcultures, thus showing high productivity. In addition, it was found efficiency and economic viability in the use of PET bottles for acclimatization. In the second chapter, we studied the induction of shoots from nodal segments of in vitro plants of M. officinalis. The nodal segments (explants) in the establishment phase, underwent disinfection solution in ethyl alcohol at a concentration of 70% for 1 minute, and sodium hypochlorite solution (NaOH) in the proportions of 3 : 1 and 4 : 1, for 15 minutes. After this, they were placed in Petri dishes containing MS medium added with 1.0 and 2.0 mg L-1 BAP plus fungicide (Carbomax®) at a concentration of 1 mg L-1, where they remained in room growth, for 30 days, photoperiod, temperature and light intensity controlled. After they were transferred to 200 ml flasks containing 20 ml of the same medium MS to ensure the development of shoots for 30 days. Then shoots were transferred to 200 ml flasks containing 20 ml of MS medium with 1.0 mg L-1 BAP and 1.0 mg L-1 GA3, to promote the elongation of shoots, where they remained for more 30 days. The concentration 1.0 mg L-1 BAP presented the highest number of shoots with an average of 4.0 shoots / explant and the use of GA3 regulator did not induce shoot elongation satisfactory.