Micropropagação de Vernonia condensata Beker

Abstract

A planta Vernonia condensata Beker é nativa da África e trazida ao Brasil nos tempos coloniais. Essa espécie pertence à família Asteraceae, possui propriedades analgésicas e de proteção gástrica. A crescente utilização dessa planta, especialmente no Recôncavo da Bahia, justifica a necessidade de medidas que minimizem o impacto de sua exploração nas reservas naturais. O estudo objetivou estabelecer protocolo eficiente de micropropagação, produzindo plantas homogêneas e de alta qualidade fitossanitária, visando futuros estudos farmacológicos, bem como distribuição, comercialização e/ou coleção in vitro. Foram utilizados, para o estabelecimento in vitro, segmentos apicais, internodais e nodais de plantas cultivadas no campo. Foram lavados em água estéril, desinfestados em solução de hipoclorito de sódio (1,0 e 2,0%), no tempo de 15 e 30 minutos e em seguida introduzidos em placa de Petri, com meio de cultura MS, durante 30 dias. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado no esquema fatorial (3x2x2), com cinco repetições (quatro segmentos/placa) e avaliou-se o percentual de contaminação. As brotações obtidas foram transferidas para frascos contendo 1,0 mg L-1 de BAP para aumentar o número de brotações, durante 30 dias. Após este período, foi montado o experimento de multiplicação in vitro. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado com seis tratamentos (concentrações de BAP - 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 mg L-1 ) e seis repetições (cinco explantes - segmentos nodais de ± 1,0 cm de comprimento – por frasco). Os frascos foram acondicionados em sala de crescimento, com temperatura de 25º ± 2ºC, intensidade luminosa de 40 µM m-2 s -1 e fotoperíodo de 16h. Após trinta dias de cultivo, avaliaram-se os parâmetros: a) número de explantes responsivos; b) número de brotos por explantes; c) altura de brotos e d) número de folhas por brotos. As brotações obtidas no melhor tratamento foram transferidas para frascos com meio de cultura de enraizamento (MS, MS/2 e MS/4). O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado, com 12 repetições e foram avaliados os parâmetros: a) percentual de enraizamento; b) número de raízes por brotos e c) comprimento da maior raiz. A aclimatação foi realizada introduzindo as microplantas em garrafas de refrigerante do tipo PET, cortadas ao meio e com sobreposição das partes, contendo terra vegetal autoclavada. Foram utilizadas as microplantas do experimento de enraizamento e manteve-se o mesmo delineamento experimental. Depois de 30 dias avaliou-se o percentual de plantas sobreviventes. Os resultados mostraram que 40,0% dos segmentos nodais (na concentração de 1,0% de hipoclorito de sódio, durante 30 minutos) foram desinfestados e sobreviveram. No experimento de multiplicação in vitro obteve-se a melhor resposta no número de brotos (4,0 brotos/explantes) e no desenvolvimento vegetativo, na concentração de 0,5 mg L-1 de BAP. O meio de cultura de enraizamento que possibilitou a melhor resposta, nos parâmetros avaliados, foi o MS/4. Durante a aclimatação obteve-se 100% de plantas sobreviventes, oriundas do meio MS/4 e possibilitou a utilização de garrafas plásticas de refrigerante (tipo PET). A realização desse trabalho permite estimar a obtenção de 32.000 mudas de alumã, após sete meses de cultivo in vitro. _____________________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT: Vernonia condensata Beker is an African plant brought to Brazil in colonial times. The species belongs to the genus Asteraceae, and has analgesic and gastric protective properties. Its increasing use especially in the Reconcavo da Bahia justifies the need of taking steps to minimize the exploitation impact on nature reserves. The aim of this study was to develop an efficient micropropagation protocol to produce homogeneous and high phytosanitary quality plants to be used in pharmacological studies or for distribution, commercialization and/or in vitro collection. For in vitro growth apical, nodal and inter-nodal segments of plants grown in the field were used. They were washed with sterile water,disinfected in a sodium hypochlorite solution (1.0 e 2.0%) for 15 and 30 minutes, and then transferred to Petri dishes containing MS medium for 30 days. In order to assess the contamination percentage, a completely randomized factorial experiment (3x2x2) with 5 repetitions (4 segments/dish) was designed. Buds were transferred to flasks containing BAP (1,0 mg L -1 ) for 30 days to increase their number. After that period a completely randomized in vitro multiplication experiment was carried out with 6 treatments (BAP concentrations of 0.0; 0.5; 1.0; 1.5; 2.0; 25 mg L -1 ) and 6 repetitions (5 explants – ± 1.0 cm long nodal segments in each flask). The flasks were maintained in a growth chamber at 25º ± 2ºC and a 16 hour light period of 40 µM m-2 s -1 . After 30 days the following parameters were assessed: a) number of responsive explants; b) number of shoots per explant; c) shoot height; and d) number of leaves per shoot. The shoots obtained in the best treatment were transferred to flasks with rooting media (MS, MS/2 and MS/4). Experimental design was completely randomized with 12 repetition, and the assessed parameters were: a) rooting percentage; b) number of roots per shoot; and c) length of the longest root. Microplants originated from the rooting experiment were acclimatized in halved and overlapped PET bottles filled with autoclaved topsoil. After 30 days the number of surviving plants was determined. Our results show that 40.0 % of the nodal segments (in 1.0 % sodium hypochlorite for 30 minutes) were adequately disinfected and survived. In the in vitro multiplication experiment the 0.5 mg L -1 concentration of BAP yielded the highest number of shoots (4.0 shoots/explant) and the best vegetative growth. With regard to the assessed parameters MS/4 was the best rooting medium with 100% survival during the acclimatization stage. This study shows that Vernonia condensata Beker in vitro culture might produce 32,000 seedlings in 7 months.